CALCIO ARSENAZO (TÉCNICA)
USO
Para
el en Vitro determinación cuantitativa de Calcio en el suero.
SIGNIFICADO
CLINICO 1 2
Calcio
Aumentado del suero se puede observar en el hyperparathyroidism, embriaguez de
vitamina D, múltiples mieloma y algunas enfermedades de neoplastic de hueso. El
calcio disminuido del suero se puede observar en el hypoparathyroidism, en la
deficiencia de vitamina D, en steatorrhea, en necrosis, y en la nefritis.
METODO:
Varias
metodologías se han desarrollado para la determinación de calcio inclusive la
fotometría de la llama, fluorescente, gravimetrito y los procedimientos de
titrimetric, el ion electrodos selectivos, y la absorción atómica. La absorción
atómica se ha recomendado como el método de referencia pero requiere
instrumentación costosa. 3
Las
metodologías específicas de la encuadernación del tinte han llegado a ser
populares para la determinación de calcio porque ellos son rápidos,
convenientes y económicos. Los procedimientos que utilizan los tintes
alizarin3-sulfonate y methylthymol azul se ha descrito. 4.5 Un método que
utiliza O-Cresolphthalein Complexone como el chromagen se desarrolló en 1966
por Connerty y Biggs, y modificó por Gitelman en 1967 y Baginski, et al en
1973. Los procedimientos de O-Cresolphthalein de 6,7,8 Complexone se han
utilizado extensamente para la determinación de calcio.
El
procedimiento presente utiliza Arsenazo III y se ha modificado para
proporcionar un sistema sumamente sensible y fijo de reactivo. El reactivo se
proporciona como un conveniente listo para utilizar líquido.
El
principio:
Alkaline
Calcium
+ Arsenazo Ill Calcium- Arsenazo Complex Medium (purple color)
El
calcio reacciona con Arsenazo III en un medio levemente alcalino para formar un
complejo de color púrpura que absorbe en 650 nm. La intensidad del color es
proporcional a la concentración del calcio.
COMPOSICION
DEL REACTIVO:
Ingredientes
Activa Concentración
Arsenazo
III 0.2 mM
Búfer
Imidazol 100 mM
Surfactante
pH
(6.55 – 6.95)
Precauciones:
1.
El reactivo es solamente para uso “in-vitro”.
2.
El reactivo puede irritar la piel. Evite el contacto. Limpíe con agua si el
contacto ocurre.
3.
El reactivo contiene Sodio Azide como un preservativo. En una forma seca esto
puede reaccionar con cobre o dirigir instalación de cañerías a formar azides
explosivo de metal. Sobre la disposición, limpíe con cantidades grandes de agua
para evitar deposito de azide.
PREPARACION
DEL REACTIVO:
Se
suministra listo para utilizar.
ESTABILIDAD
Y ALMACENAMIENTO:
Cuando
almacenado en 2-25°C, el reactivo es fijo hasta la fecha de caducidad indicada
en la etiqueta.
INDICACIONES
DE DETERIORO EN EL REACTIVO
El
reactivo no se debe utilizar si:
1.
El reactivo es túrbido.
2.
El reactivo falla de encontrar los parámetros indicados del desempeño.
COLECCION
y ALMACENAJE DE LA MUESTRA:
1.Suero
Fresco y no hemolizado es el espécimen preferido.
2.
Los anticoagulantes de otra manera que heparina no se deben utilizar. 9
3.
Remueva el suero de su coagulante tan pronto posible desde que glóbulos rojos
pueden absorber calcio. 10
4.
Las muestras que contienen precipitación visible no deben ser usados.11,12
5.
El calcio en el suero es fijo por una semana se mantiene refrigerado (2-6°C), y
hasta cinco meses congelados (-15 a -25 °C) cuando protegido de la evaporación 13
6. Muestras no se deben
descongelar y volver a congelar.
INTERFERENCIAS:
1.
Los estudios para determinar el nivel de interferencia para la hemoglobina,
bilirubin, y lipemia se llevaron a cabo, los resultados siguientes se
obtuvieron:
Hemoglobina:
Ninguna
interferencia significativa (<10%) de la hemoglobina hasta 300 mg/dl.
Bilirubin:
Ninguna
interferencia significativa (<10%) del bilirubin hasta 24.3 mg/dl.
Lipemia:
Ninguna
interferencia significativa (<10%) de lipemia hasta 1020 mg/dl medido como
triglicéridos.
2.
Varias drogas y las substancias pueden afectar la certeza de esta prueba. Vea a
Jóvenes, et al. 14
EQUIPO
ADICIONAL REQUERIDO PERO NO INCLUIDO:
1.
Un analizador clínico de química capaz de mantener la temperatura (37°C
constante), y la medida de absorbancia en 650 nm (630 - 650).
2.
El agua Deionizada y equipo relacionado, por ejemplo: pipetas
3.
Artículos de consumo específicos, por ejemplo: prueba copas
4.
Controles y materiales de Calibración tales como esos proporcionado por JAS
Diagnostics.
PROCEDIMIENTO
de ENSAYO:
Estas
instrucciones deben ser utilizadas como una pauta general para adaptar
instrumentos automatizados. Refiérase a sus instrucciones específicas para su
instrumento (JAS), disponibles a su pedido.
Parámetros
Calcio
TEMPERATURA
37C
Longitud
de Onda 650 nm
Tipo
de Ensayo Punto Final
Dirección
Aumentativo
Ratio:
Muestra/Ensayo 1:50
Volumen
de muestra 0.02 mL (20uL)
Volumen
de reactivo 1.0 mL
Tiempo
de Incubación >1 min
Notas
del Procedimiento
1.
El color final es fijo durante 60 minutos.
2.
La contaminación de la cristalería con calcio afectará adversamente los
resultados de la prueba. El vidrio de ácido-lavó o probetas plásticas se
recomiendan.
3.
Los volúmenes del reactivo y la muestra pueden necesitar ser ajustados según
los requisitos del spectrophotometer específico siendo
utilizado.
CALCULOS
Absorbancia
de prueba Conc X. de = Calcio (mg/dl)
Absorbance
de Std uniforme.
Ejemplo:
Absorbance
de la muestra = 0.81
Absorbance
del estándar = 0.80
Concentración
del estándar = 10 mg/dl
0.81
X 10 = 10.1 mg/dL Calcio
0.80
Limitaciones
1.
Las muestras con calcio encima de 15.0 mg/dL se deben diluir 1:1 con salino,
re-assayed, y el resultado multiplicado por dos.
2.
Muestras severamente lipemicas se deben correr con un blanco del suero para la
certeza más grande.
CALIBRACION:
Esta
prueba debe ser calibrada utilizando un calibrador como el Calibrador de
Quimica de JAS ( P/N: CAL1-5) o un estandard apropiado.
CONTROL
DE CALIDAD:
La integridad de la reaccion
debe ser evaluada usando un control de dos niveles con valores conocidos como
el JAS Control de Quimica ( P/N: CON1-5 y CON2-5).
Valores
Esperados:
Adultos:
8.5 - 10.4 mg/dL 15
Recién
Nacido: 7.8 - 11.2 mg/dL 16
Se
recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango normal.
Linealidad:
Cuándo
se evalua como recomendado el ensayo es linear desde 0.2 hasta 15.0 mg/dL.
Comparación
del método:
Los
estudios realizaron entre este procedimiento y una metodología semejante rindió
los resultados siguientes:
Número
de pares de muestras: 50
Fluctuacion
de muestras: 5.2 – 15.0 (mg/dL)
Coeficiente
de Correlación: 0.9927
Pendiente:
0.9835
Intercepto:
-0.02 (mg/dL)
Precision:
Entre
corridas Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3
Promedio
(mg/dL) 6.60 9.70 12.21
S.D.
(mg/dL) 0.04 0.08 1.16
C.V.
(%) 0.7 0.8 1.3
Entre
series Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3
S.D.
(mg/dL) 0.1 1.14 1.18
C.V.
(%) 1.5 1.4 1.4
Sensitividad:
Un
factor de la calibración de aproximadamente 32.02fue obtenido, cuál equivale a
una sensibilidad de 0.031 Δ Abs por mg/dl.
*
NOTA: El desempeño se
estableció en el Synchron CX.
Referencias:
1. Tietz, N.W., Fundamentals of
Clinical Chemistry, Philadelphia, W.B. Saunders, p.149 (1984).
2. Henry, J.B., Clinical Diagnosis
and Management by Laboratory Methods, Philadelphia,, W.B. Saunders, p.149
(1984).
3. Call, J.P., et al, N.B.S., Sp.
Publication 260:36 (1972).
4. Connerty, H.V. and Blggs, A.R.,
Clin. Chem. 11:716 (1965).
5. Glndler, E.M. and King, J.D.,
Am. J. Clin. Path. 58:376 (1972).
6 Connerty, H.V. and Blggs, A.R.,
Am. J. Clin. Path. 45:290 (1966).
7. Gitelman, H.J., Anal. Biochem.
18:521 (1967).
8. Baginski, E.S., St et al, Clin.
Chem. Acta 46:49 (1973).
9. Richterich, R., Clinical
Chemistry: Theory and Practice, New York, Academic Press, p.304 (1969).
10. Peters, J.P., Van Slyke, D.D.,
Quantitative Clinical Chemistry - Vot 2, Baltimore, Williams and Wilkins,
(1932).
11. Chen, P.S., et al, Anal. Chem.
26:1967 (1954).
12. Tayeau, F., et al, Bull. Soc.
Pharm. Bordeaux, 95:206 (1956).
13. Henry, R.J., et al, Clinical
Chemistry: Principles and Technics, Hagerstown (MD), Harper and Row, p. 669
(1974).
14. Young, D.S., et al, Clin. Chem.
21:1D (1975).
15. Tietz, N.W., Fundamentals of
Clinical Chemistry, Philadelphia, WE. Saunders, p. 1208 (1984).
16. Meites, Samuel, Pediatric
Clinical Chemistry, Washington DC, AACC Press, p. 81 (1989).
JAS
Diagnostics, Inc.
14100 NW
57th Court. Miami Lakes FL 33014
Datos de Contacto:Correo: distribuidora0270@gmail.com
Telef. 0212 731 8174
Horario: Lunes a Viernes de
8:00am a 12:00pm y de 2:00pm a 4:00pm