CALCIO ARSENAZO (TÉCNICA)

CALCIO ARSENAZO (TÉCNICA)

USO

Para el en Vitro determinación cuantitativa de Calcio en el suero.

SIGNIFICADO CLINICO 1 2

Calcio Aumentado del suero se puede observar en el hyperparathyroidism, embriaguez de vitamina D, múltiples mieloma y algunas enfermedades de neoplastic de hueso. El calcio disminuido del suero se puede observar en el hypoparathyroidism, en la deficiencia de vitamina D, en steatorrhea, en necrosis, y en la nefritis.

METODO:

Varias metodologías se han desarrollado para la determinación de calcio inclusive la fotometría de la llama, fluorescente, gravimetrito y los procedimientos de titrimetric, el ion electrodos selectivos, y la absorción atómica. La absorción atómica se ha recomendado como el método de referencia pero requiere instrumentación costosa. 3

Las metodologías específicas de la encuadernación del tinte han llegado a ser populares para la determinación de calcio porque ellos son rápidos, convenientes y económicos. Los procedimientos que utilizan los tintes alizarin3-sulfonate y methylthymol azul se ha descrito. 4.5 Un método que utiliza O-Cresolphthalein Complexone como el chromagen se desarrolló en 1966 por Connerty y Biggs, y modificó por Gitelman en 1967 y Baginski, et al en 1973. Los procedimientos de O-Cresolphthalein de 6,7,8 Complexone se han utilizado extensamente para la determinación de calcio.

El procedimiento presente utiliza Arsenazo III y se ha modificado para proporcionar un sistema sumamente sensible y fijo de reactivo. El reactivo se proporciona como un conveniente listo para utilizar líquido.

El principio:

Alkaline

Calcium + Arsenazo Ill Calcium- Arsenazo Complex Medium (purple color)

El calcio reacciona con Arsenazo III en un medio levemente alcalino para formar un complejo de color púrpura que absorbe en 650 nm. La intensidad del color es proporcional a la concentración del calcio.

COMPOSICION DEL REACTIVO:

Ingredientes Activa Concentración

Arsenazo III 0.2 mM

Búfer Imidazol 100 mM

Surfactante

pH (6.55 – 6.95)

Precauciones:

1. El reactivo es solamente para uso “in-vitro”.

2. El reactivo puede irritar la piel. Evite el contacto. Limpíe con agua si el contacto ocurre.

3. El reactivo contiene Sodio Azide como un preservativo. En una forma seca esto puede reaccionar con cobre o dirigir instalación de cañerías a formar azides explosivo de metal. Sobre la disposición, limpíe con cantidades grandes de agua para evitar deposito de azide.

PREPARACION DEL REACTIVO:

Se suministra listo para utilizar.

ESTABILIDAD Y ALMACENAMIENTO:

Cuando almacenado en 2-25°C, el reactivo es fijo hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.

INDICACIONES DE DETERIORO EN EL REACTIVO

El reactivo no se debe utilizar si:

1. El reactivo es túrbido.

2. El reactivo falla de encontrar los parámetros indicados del desempeño.

COLECCION y ALMACENAJE DE LA MUESTRA:

1.Suero Fresco y no hemolizado es el espécimen preferido.

2. Los anticoagulantes de otra manera que heparina no se deben utilizar. 9

3. Remueva el suero de su coagulante tan pronto posible desde que glóbulos rojos pueden absorber calcio. 10

4. Las muestras que contienen precipitación visible no deben ser usados.11,12

5. El calcio en el suero es fijo por una semana se mantiene refrigerado (2-6°C), y hasta cinco meses congelados (-15 a -25 °C) cuando protegido de la evaporación 13

6. Muestras no se deben descongelar y volver a congelar.

INTERFERENCIAS:

1. Los estudios para determinar el nivel de interferencia para la hemoglobina, bilirubin, y lipemia se llevaron a cabo, los resultados siguientes se obtuvieron:

Hemoglobina:

Ninguna interferencia significativa (<10%) de la hemoglobina hasta 300 mg/dl.

Bilirubin:

Ninguna interferencia significativa (<10%) del bilirubin hasta 24.3 mg/dl.

Lipemia:

Ninguna interferencia significativa (<10%) de lipemia hasta 1020 mg/dl medido como triglicéridos.

2. Varias drogas y las substancias pueden afectar la certeza de esta prueba. Vea a Jóvenes, et al. 14

EQUIPO ADICIONAL REQUERIDO PERO NO INCLUIDO:

1. Un analizador clínico de química capaz de mantener la temperatura (37°C constante), y la medida de absorbancia en 650 nm (630 - 650).

2. El agua Deionizada y equipo relacionado, por ejemplo: pipetas

3. Artículos de consumo específicos, por ejemplo: prueba copas

4. Controles y materiales de Calibración tales como esos proporcionado por JAS Diagnostics.

PROCEDIMIENTO de ENSAYO:

Estas instrucciones deben ser utilizadas como una pauta general para adaptar instrumentos automatizados. Refiérase a sus instrucciones específicas para su instrumento (JAS), disponibles a su pedido.

Parámetros

Calcio

TEMPERATURA 37C

Longitud de Onda 650 nm

Tipo de Ensayo Punto Final

Dirección Aumentativo

Ratio: Muestra/Ensayo 1:50

Volumen de muestra 0.02 mL (20uL)

Volumen de reactivo 1.0 mL

Tiempo de Incubación >1 min

Notas del Procedimiento

1. El color final es fijo durante 60 minutos.

2. La contaminación de la cristalería con calcio afectará adversamente los resultados de la prueba. El vidrio de ácido-lavó o probetas plásticas se recomiendan.

3. Los volúmenes del reactivo y la muestra pueden necesitar ser ajustados según los requisitos del spectrophotometer específico siendo

utilizado.

CALCULOS

Absorbancia de prueba Conc X. de = Calcio (mg/dl)

Absorbance de Std uniforme.

Ejemplo:

Absorbance de la muestra = 0.81

Absorbance del estándar = 0.80

Concentración del estándar = 10 mg/dl

0.81 X 10 = 10.1 mg/dL Calcio

0.80

Limitaciones

1. Las muestras con calcio encima de 15.0 mg/dL se deben diluir 1:1 con salino, re-assayed, y el resultado multiplicado por dos.

2. Muestras severamente lipemicas se deben correr con un blanco del suero para la certeza más grande.

CALIBRACION:

Esta prueba debe ser calibrada utilizando un calibrador como el Calibrador de Quimica de JAS ( P/N: CAL1-5) o un estandard apropiado.

CONTROL DE CALIDAD:

La integridad de la reaccion debe ser evaluada usando un control de dos niveles con valores conocidos como el JAS Control de Quimica ( P/N: CON1-5 y CON2-5).

Valores Esperados:

Adultos: 8.5 - 10.4 mg/dL 15

Recién Nacido: 7.8 - 11.2 mg/dL 16

Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango normal.

Linealidad:

Cuándo se evalua como recomendado el ensayo es linear desde 0.2 hasta 15.0 mg/dL.

Comparación del método:

Los estudios realizaron entre este procedimiento y una metodología semejante rindió los resultados siguientes:

Número de pares de muestras: 50

Fluctuacion de muestras: 5.2 – 15.0 (mg/dL)

Coeficiente de Correlación: 0.9927

Pendiente: 0.9835

Intercepto: -0.02 (mg/dL)

Precision:

Entre corridas Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3

Promedio (mg/dL) 6.60 9.70 12.21

S.D. (mg/dL) 0.04 0.08 1.16

C.V. (%) 0.7 0.8 1.3

Entre series Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3

S.D. (mg/dL) 0.1 1.14 1.18

C.V. (%) 1.5 1.4 1.4

Sensitividad:

Un factor de la calibración de aproximadamente 32.02fue obtenido, cuál equivale a una sensibilidad de 0.031 Δ Abs por mg/dl.

* NOTA: El desempeño se estableció en el Synchron CX.

Referencias:

1. Tietz, N.W., Fundamentals of Clinical Chemistry, Philadelphia, W.B. Saunders, p.149 (1984).

2. Henry, J.B., Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods, Philadelphia,, W.B. Saunders, p.149 (1984).

3. Call, J.P., et al, N.B.S., Sp. Publication 260:36 (1972).

4. Connerty, H.V. and Blggs, A.R., Clin. Chem. 11:716 (1965).

5. Glndler, E.M. and King, J.D., Am. J. Clin. Path. 58:376 (1972).

6 Connerty, H.V. and Blggs, A.R., Am. J. Clin. Path. 45:290 (1966).

7. Gitelman, H.J., Anal. Biochem. 18:521 (1967).

8. Baginski, E.S., St et al, Clin. Chem. Acta 46:49 (1973).

9. Richterich, R., Clinical Chemistry: Theory and Practice, New York, Academic Press, p.304 (1969).

10. Peters, J.P., Van Slyke, D.D., Quantitative Clinical Chemistry - Vot 2, Baltimore, Williams and Wilkins, (1932).

11. Chen, P.S., et al, Anal. Chem. 26:1967 (1954).

12. Tayeau, F., et al, Bull. Soc. Pharm. Bordeaux, 95:206 (1956).

13. Henry, R.J., et al, Clinical Chemistry: Principles and Technics, Hagerstown (MD), Harper and Row, p. 669 (1974).

14. Young, D.S., et al, Clin. Chem. 21:1D (1975).

15. Tietz, N.W., Fundamentals of Clinical Chemistry, Philadelphia, WE. Saunders, p. 1208 (1984).

16. Meites, Samuel, Pediatric Clinical Chemistry, Washington DC, AACC Press, p. 81 (1989).

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