GAMMA-GT
(LIQUIDA) TECNICA
USO
Este
reactivo es usado para la determinación cinética cuantitativa vitro de la gamma
glutamyltransferase (Gamma-GT) en el suero humano.
RESUMEN
EXPLAINACION 1,2
La
gamma-glutamyltransferase (Gamma-GT) es una enzima presente en el hígado y en
el conducto de bilis el cual es el indicador más sensible de enfermedades
hepatobiliarias. Debido a un valor predecible negativo alto para estas
enfermedades, la medida de GT gamma es extensamente usada para excluir un
origen hepatico o biliar. Juntos con otras enzimas Gamma-GT es un instrumento
valioso para el diagnóstico diferencial en enfermedades de hígado.
METODOLOGÍA
Los
métodos para determinar Gamma-GT están basados en el uso de derivados glutamyl
de amines aromático como substrate Orlowski material 3 y Meiser introdujo
Gamma-Glutamyl-p-nitroanilide como un substrate en 19634 con Kulhanek y Dimov
(1966) añadieron glycylglycine y aumentaron considerablemente la velocidad de
la reacción 5 en 1969, Szasz publicó un procedimiento cinético para la Gamma-GT6
en cuyo principio el procedimiento presente está basado. El Szasz y Persijn7 más
tarde reportaron que derivitivado 3-carboxyl,
L-Gamma-glutamyl-3-carboxy-4-nitroanalide podría ser substituido por el
L-y-glutamyl-p-nitoanilide, produciendo un reactivo mayor soluble al agua y
estable. El reactivo de Gamma-GT de Jas usa este derivado 3-carboxyl soluble.
El método JAS está basado en la prueba fotométrica cinética, de acuerdo a la
Federación Internacional de Química Clínica y Medicina de Laboratorio (IFCC). 8
Principio
L-Gamma-Glutamyl-3-carboxy-4-nitroanilide
+ Glycylglycine
Gamma-GT
L-Gamma-glutamyl-glycylglycine
+ 5-amino-2-nitrobenzoate
La
gamma-GT en la muestra cataliza la transferencia del grupo glutamyl de
L-Gamma-glutamyl-3-carboxy-4-nitroanilide a glycylglycine según la reacción
anterior. La cantidad de 5-amino-2-nitrobenzoate formado es proporcional a la
actividad Gamma-GT y puede ser medida cineticamente en 405 nm por la intensidad
creciente del color amarillo formado.
COMPOSICION
Ingredientes
Activos Concentración
Reactivo
1
Glycylglycine
150 mM
Reactivo
2
L-Gamma-glutamyl-3-carboxy-4-nitroanilide
6.0 mM
Concentraciones
en el reactivo de trabajo.
pH
(7.7 – 8.1)
Precauciones
y Advertencias:
1.
Solo para uso diagnóstico in vitro .
2.
No utilizar la pipeta con la boca. Evite el contacto con piel y ojos. De ser
derramado, lave a fondo el área afectada con el agua. Para información
adicional, consulte la Hoja se Datos de Seguridad de GGT.
3.
El reactivo contiene el Sodio Azide como un preservativo. En un estado seco
puede reaccionar con cobre o fontanería de plomo para formar el metal explosivo
azides. Al descarte, echar cantidades grandes de agua para prevenir el
crecimiento de ácido.
4.
No usar el reactivo después de la fecha de caducidad impresa en el equipo
PREPARACIÓN
DE REACTIVO
Los
reactivos son suministrados en dos frascos, listos a usar en forma líquida.
Para
algunos analizadores, los reactivos pueden ser combinados para hacer una
solución de trabajo mezclando 4 partes del Reactivo 1 con 1 parte del Reactivo
2 (p.ej, 20mL Rgt 1 a 5mL Rgt 2). Para instrucciones en el uso, consulte la
Hoja de Aplicación de Instrumento JAS específica para su instrumento.
ALMACENAJE
DE REACTIVO
1.
Almacenar los reactivos en 2 8 ° C (refrigerado).
2.
Los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad cuando almacenado en
2-8°C.
3.
El reactivo de trabajo es estable durante.
4
semanas cuando es almacenado en (2 -8°C).4. No congelar los reactivos.
5.
El reactivo 2 debería ser protegido de la luz.
DETERIODO
DEL REACTIVO
NO
USE EL REACTIVO SI:
1.
El reactivo es turbio.
2. El reactivo tiene una
densidad óptica mayor que 1.5 en 405 nm.
COLECCIÓN
DE ESPÉCIMEN Y ALMACENAJE
La
Gamma-GT de suero es estable durante siete días en 2-8°C y dos meses congelados
(-20°c)
y protegido de la evaporación 9
INTERFERENCIAS
1.
Los estudios para determinar el nivel de interferencia para hemoglobina,
bilirubin, y lipernia, fueron realizados, los resultados siguientes fueron
obtenidos:
Hemoglobina:
Ninguna
interferencia significativa ( 10%) de hemoglobina hasta 1000 mg/dL.
Bilirubin:
Ninguna
interferencia significativa ( 10%) de bilirubin hasta 22.7 mg/dL.
Lipemia:
Ninguna
interferencia significativa ( 10%) de lipernia hasta 1020 mg/dL medidos como
triglycerides.
2.Varias
medicinas y sustancias pueden afectar la exactitud de esta prueba. Ver Joven, et
al 10
EQUIPO
ADICIONAL REQUERIDO PERO NO PROPORCIONADO
1.
Un analizador de química clínico con temperatura de constante de mantenimiento
capaz (37°C) y medición absorbance en 405nm.
2.
Agua de Deionizada y equipo relacionado, p.ej: pipetas
3.
Analizador bienes consumibles específicos, p.ej: tazas de muestra
4.
Controlar el material como aquellos proporcionados por el JAS Diagnostics.
PROCEDIMIENTO
DE ENSAYO
Éstas
instrucciones deben utilizarse como una guia general para adaptarse a
instrumentos automatizados. Refiérase a las aplicaciones de instrumento
disponibles en JAS.
Parametros
Gamma-GT
(Liquida)
TEMPERATURA:
37°C
LARGO
DE ONDA: 405 nm
TIPO
DE ENSAYO: Rate/Cinetica
DIRECCION:
Aumentativa
e.g.
VOL. MUESTRA: 0.050 mL (50 L)
Reactivo
1 Vol. 1.0 mL (1000 L)
Reactivo
2 Vol. 0.250 mL (250 L)
TIEMPO
INCUBACION: 1 Min
TIEMPO
LECTURA: 3 Min
Notas
de Procedimiento:
1.
El reactivo y los volúmenes de muestra pueden ser cambiados proporcionalmente
para acomodar varias exigencias de instrumento.
2.
Las muestras con valores encima de 1000 U/L deberían ser diluidas 1:1 con la
salina, re ensayadas y los resultados multiplicados por dos.
3.
Si el espetrofotometro usado es equipado con una cubeta de temperatura controlada,
la mezcla de reacción puede ser dejada en la cubeta mientras las lecturas
absorbancia son tomadas.
Cálculo
Una
Unidad (U/L) es definida como la cantidad de enzima que cataliza la
transformación de un microtopo de substrate por minuto en condiciones
especificadas. Por ejemplo:
U/L
= AAbs./mIn. x 1.300 x 1000 = AAbs./min. x 2737
9.5
x 1 x 0.050
Donde:
AAbs / minuto. = cambio de Absorbance
1000
= conversión de U/ml a U/L
1.300
= volumen de reacción total (mL)
9.5
= absorbencia de Millimolar de 5-amino-2-nitrobenzoate.
1
= camino ligero en cm
0.050
= volumen de muestra (mL)
Ejemplo:
Si su Abs / minuto = 0.06
Entonces
0.06 x 5333 = 320 U/L.
NOTA:
1.
Si los parámetros de prueba son cambiados el factor tiene que ser calculado de
nuevo usando la fórmula anterior.
2.
Para convertir a unidades Sl (nkat/L) multiplican U/L por .01667.
CALIBRACIÓN
El procedimiento es calibrado
por medio de la absorbencia millimolar de 5-amino-2-nitrobenzoate tomado como
9.5 en 405nm en las condiciones especificadas. Los resultados están basados en
el cambio de absorbancia por minuto. Todos los parámetros deben ser conocidos y
controlados.
CONTROL
DE CALIDAD
La
integridad de la reaccion debe ser evaluada usando un control de dos niveles
con valores conocidos como el JAS Control de Quimica ( P/N: CON1-5 y CON2-5).
VALORES
ESPERADOS (37°C) 7,8
Adultos:
Mujeres 9 - 36 U/L
Hombre
12 - 64 U/L
Ninos
/ Adolecentes:
1
dia – 6 meses Mujeres 15 - 132 U/L
Hombre
12 - 122 U/L
6
meses – 1 año Mujeres 1 - 39 U/L
Hombre
1 - 39 U/L
1
– 12 años(s) Mujeres 4 - 22 U/L
Hombre
3 - 22 U/L
13
– 18 años Mujeres 4 - 24 U/L
Hombre
2 - 42 U/L
Es
fuertemente recomendado cada laboratorio determinen su propios valores de
referencia.
FUNCIONAMIENTO
Linealidad:
Cuando
dirigido como recomendado el ensayo es lineal de 2.8 a 1000 U/L.
Comparación
de Método:
Los
estudios realizados entre este procedimiento y un IFCC procedimiento similar
cedieron los resultados siguientes:
Número
de pares de muestras: 43
Rango
de muestras: 3.0 – 380.0 (U/L)
Coeficiente
de Correlación: 0.9992
Cuesta:
0.9880
Intercepto:
-0.4 (U/L)
Precisión:
Entre
corrida Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3
Promedio
(U/L) 34.0 81.6 148.2
S.D.
(U/L) 1.3 1.9 2.5
C.V.
(%) 3.9 2.3 1.7
Total
Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3
S.D.
(U/L) 1.3 2.3 2.9
C.
V. (%) 3.9 2.8 2.0
Sensitividad:
La
sensitividad de este reactivo cuando usado segun recomendado es 0.0103 mA /
min por U/L
Nota:
Datos obtenidos mediante pruebas realizadas en el Synchron CX..
REFERENCIAS
1.
Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1st ed. Frankfurt: TH-Books
Verlagsgesellschaft; 1998. P.80-6.
2.
Moss DW, Henderson AR. Clinical enzymology. In:Burtis CA, Ashwood ER, editors.
Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia: WB Saunders
Company; 1999. P. 617-721.
3.
Demetriou, J.A., Drewes, P.A., Gin, J.B., Clinical Chemistry: Principles and
Technics, 2nd Ed., Hagerstown (MD), Harper Row, pp 872-873 (1974).
4.
Orlowski, M., Meister, A., Biochem, Biophys. Acta 73:679 (1963).
5.
Kulhanek, V., Dimov, D.M., Clin. Chem. Acta 14:619 (1966).
6.
Szasz, G., Clin. Chem. 15:124 (1969).
7.
Szasz, G., Persijn, J.P., et al, A Klin. Chem. Klin. Biochem. 12:228 (1974).
8.
Shaw LM, Stromme JH, London JL, Theodorsen L. International Federation of
Clinical Chemistry, (IFCC), Scientific Committee, Analytical Section. IFCC
methods for the measurment of catalytic concentration of enzymes. Part 4. IFCC
method for gamma-glutamyl-transferase [(gamma-glutamyl)-peptide: amino acid
gamma-glutamyltransferase, EC 2.3.2.2]. J Clin Chem Clin Biochem 1983;
21:633-46.
9.
Rosalki, S.B., Advances in Clinical Chemistry, Vol. 17, New York, Academic
Press, p.53 (1975).
10. Young, D.S., et al, Clin. Chem.
21:1D (1975).
JAS Diagnostics,
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Miami Lakes Florida 33014
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