GAMMA-GT
(LIQUIDA) TECNICA
USO
Este
reactivo es usado para la determinaci贸n cin茅tica cuantitativa vitro de la gamma
glutamyltransferase (Gamma-GT) en el suero humano.
RESUMEN
EXPLAINACION 1,2
La
gamma-glutamyltransferase (Gamma-GT) es una enzima presente en el h铆gado y en
el conducto de bilis el cual es el indicador m谩s sensible de enfermedades
hepatobiliarias. Debido a un valor predecible negativo alto para estas
enfermedades, la medida de GT gamma es extensamente usada para excluir un
origen hepatico o biliar. Juntos con otras enzimas Gamma-GT es un instrumento
valioso para el diagn贸stico diferencial en enfermedades de h铆gado.
METODOLOG脥A
Los
m茅todos para determinar Gamma-GT est谩n basados en el uso de derivados glutamyl
de amines arom谩tico como substrate Orlowski material 3 y Meiser introdujo
Gamma-Glutamyl-p-nitroanilide como un substrate en 19634 con Kulhanek y Dimov
(1966) a帽adieron glycylglycine y aumentaron considerablemente la velocidad de
la reacci贸n 5 en 1969, Szasz public贸 un procedimiento cin茅tico para la Gamma-GT6
en cuyo principio el procedimiento presente est谩 basado. El Szasz y Persijn7 m谩s
tarde reportaron que derivitivado 3-carboxyl,
L-Gamma-glutamyl-3-carboxy-4-nitroanalide podr铆a ser substituido por el
L-y-glutamyl-p-nitoanilide, produciendo un reactivo mayor soluble al agua y
estable. El reactivo de Gamma-GT de Jas usa este derivado 3-carboxyl soluble.
El m茅todo JAS est谩 basado en la prueba fotom茅trica cin茅tica, de acuerdo a la
Federaci贸n Internacional de Qu铆mica Cl铆nica y Medicina de Laboratorio (IFCC). 8
Principio
L-Gamma-Glutamyl-3-carboxy-4-nitroanilide
+ Glycylglycine
Gamma-GT
L-Gamma-glutamyl-glycylglycine
+ 5-amino-2-nitrobenzoate
La
gamma-GT en la muestra cataliza la transferencia del grupo glutamyl de
L-Gamma-glutamyl-3-carboxy-4-nitroanilide a glycylglycine seg煤n la reacci贸n
anterior. La cantidad de 5-amino-2-nitrobenzoate formado es proporcional a la
actividad Gamma-GT y puede ser medida cineticamente en 405 nm por la intensidad
creciente del color amarillo formado.
COMPOSICION
Ingredientes
Activos Concentraci贸n
Reactivo
1
Glycylglycine
150 mM
Reactivo
2
L-Gamma-glutamyl-3-carboxy-4-nitroanilide
6.0 mM
Concentraciones
en el reactivo de trabajo.
pH
(7.7 – 8.1)
Precauciones
y Advertencias:
1.
Solo para uso diagn贸stico in vitro .
2.
No utilizar la pipeta con la boca. Evite el contacto con piel y ojos. De ser
derramado, lave a fondo el 谩rea afectada con el agua. Para informaci贸n
adicional, consulte la Hoja se Datos de Seguridad de GGT.
3.
El reactivo contiene el Sodio Azide como un preservativo. En un estado seco
puede reaccionar con cobre o fontaner铆a de plomo para formar el metal explosivo
azides. Al descarte, echar cantidades grandes de agua para prevenir el
crecimiento de 谩cido.
4.
No usar el reactivo despu茅s de la fecha de caducidad impresa en el equipo
PREPARACI脫N
DE REACTIVO
Los
reactivos son suministrados en dos frascos, listos a usar en forma l铆quida.
Para
algunos analizadores, los reactivos pueden ser combinados para hacer una
soluci贸n de trabajo mezclando 4 partes del Reactivo 1 con 1 parte del Reactivo
2 (p.ej, 20mL Rgt 1 a 5mL Rgt 2). Para instrucciones en el uso, consulte la
Hoja de Aplicaci贸n de Instrumento JAS espec铆fica para su instrumento.
ALMACENAJE
DE REACTIVO
1.
Almacenar los reactivos en 2 8 ° C (refrigerado).
2.
Los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad cuando almacenado en
2-8°C.
3.
El reactivo de trabajo es estable durante.
4
semanas cuando es almacenado en (2 -8°C).4. No congelar los reactivos.
5.
El reactivo 2 deber铆a ser protegido de la luz.
DETERIODO
DEL REACTIVO
NO
USE EL REACTIVO SI:
1.
El reactivo es turbio.
2. El reactivo tiene una
densidad 贸ptica mayor que 1.5 en 405 nm.
COLECCI脫N
DE ESP脡CIMEN Y ALMACENAJE
La
Gamma-GT de suero es estable durante siete d铆as en 2-8°C y dos meses congelados
(-20°c)
y protegido de la evaporaci贸n 9
INTERFERENCIAS
1.
Los estudios para determinar el nivel de interferencia para hemoglobina,
bilirubin, y lipernia, fueron realizados, los resultados siguientes fueron
obtenidos:
Hemoglobina:
Ninguna
interferencia significativa ( 10%) de hemoglobina hasta 1000 mg/dL.
Bilirubin:
Ninguna
interferencia significativa ( 10%) de bilirubin hasta 22.7 mg/dL.
Lipemia:
Ninguna
interferencia significativa ( 10%) de lipernia hasta 1020 mg/dL medidos como
triglycerides.
2.Varias
medicinas y sustancias pueden afectar la exactitud de esta prueba. Ver Joven, et
al 10
EQUIPO
ADICIONAL REQUERIDO PERO NO PROPORCIONADO
1.
Un analizador de qu铆mica cl铆nico con temperatura de constante de mantenimiento
capaz (37°C) y medici贸n absorbance en 405nm.
2.
Agua de Deionizada y equipo relacionado, p.ej: pipetas
3.
Analizador bienes consumibles espec铆ficos, p.ej: tazas de muestra
4.
Controlar el material como aquellos proporcionados por el JAS Diagnostics.
PROCEDIMIENTO
DE ENSAYO
脡stas
instrucciones deben utilizarse como una guia general para adaptarse a
instrumentos automatizados. Refi茅rase a las aplicaciones de instrumento
disponibles en JAS.
Parametros
Gamma-GT
(Liquida)
TEMPERATURA:
37°C
LARGO
DE ONDA: 405 nm
TIPO
DE ENSAYO: Rate/Cinetica
DIRECCION:
Aumentativa
e.g.
VOL. MUESTRA: 0.050 mL (50 L)
Reactivo
1 Vol. 1.0 mL (1000 L)
Reactivo
2 Vol. 0.250 mL (250 L)
TIEMPO
INCUBACION: 1 Min
TIEMPO
LECTURA: 3 Min
Notas
de Procedimiento:
1.
El reactivo y los vol煤menes de muestra pueden ser cambiados proporcionalmente
para acomodar varias exigencias de instrumento.
2.
Las muestras con valores encima de 1000 U/L deber铆an ser diluidas 1:1 con la
salina, re ensayadas y los resultados multiplicados por dos.
3.
Si el espetrofotometro usado es equipado con una cubeta de temperatura controlada,
la mezcla de reacci贸n puede ser dejada en la cubeta mientras las lecturas
absorbancia son tomadas.
C谩lculo
Una
Unidad (U/L) es definida como la cantidad de enzima que cataliza la
transformaci贸n de un microtopo de substrate por minuto en condiciones
especificadas. Por ejemplo:
U/L
= AAbs./mIn. x 1.300 x 1000 = AAbs./min. x 2737
9.5
x 1 x 0.050
Donde:
AAbs / minuto. = cambio de Absorbance
1000
= conversi贸n de U/ml a U/L
1.300
= volumen de reacci贸n total (mL)
9.5
= absorbencia de Millimolar de 5-amino-2-nitrobenzoate.
1
= camino ligero en cm
0.050
= volumen de muestra (mL)
Ejemplo:
Si su Abs / minuto = 0.06
Entonces
0.06 x 5333 = 320 U/L.
NOTA:
1.
Si los par谩metros de prueba son cambiados el factor tiene que ser calculado de
nuevo usando la f贸rmula anterior.
2.
Para convertir a unidades Sl (nkat/L) multiplican U/L por .01667.
CALIBRACI脫N
El procedimiento es calibrado
por medio de la absorbencia millimolar de 5-amino-2-nitrobenzoate tomado como
9.5 en 405nm en las condiciones especificadas. Los resultados est谩n basados en
el cambio de absorbancia por minuto. Todos los par谩metros deben ser conocidos y
controlados.
CONTROL
DE CALIDAD
La
integridad de la reaccion debe ser evaluada usando un control de dos niveles
con valores conocidos como el JAS Control de Quimica ( P/N: CON1-5 y CON2-5).
VALORES
ESPERADOS (37°C) 7,8
Adultos:
Mujeres 9 - 36 U/L
Hombre
12 - 64 U/L
Ninos
/ Adolecentes:
1
dia – 6 meses Mujeres 15 - 132 U/L
Hombre
12 - 122 U/L
6
meses – 1 a帽o Mujeres 1 - 39 U/L
Hombre
1 - 39 U/L
1
– 12 a帽os(s) Mujeres 4 - 22 U/L
Hombre
3 - 22 U/L
13
– 18 a帽os Mujeres 4 - 24 U/L
Hombre
2 - 42 U/L
Es
fuertemente recomendado cada laboratorio determinen su propios valores de
referencia.
FUNCIONAMIENTO
Linealidad:
Cuando
dirigido como recomendado el ensayo es lineal de 2.8 a 1000 U/L.
Comparaci贸n
de M茅todo:
Los
estudios realizados entre este procedimiento y un IFCC procedimiento similar
cedieron los resultados siguientes:
N煤mero
de pares de muestras: 43
Rango
de muestras: 3.0 – 380.0 (U/L)
Coeficiente
de Correlaci贸n: 0.9992
Cuesta:
0.9880
Intercepto:
-0.4 (U/L)
Precisi贸n:
Entre
corrida Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3
Promedio
(U/L) 34.0 81.6 148.2
S.D.
(U/L) 1.3 1.9 2.5
C.V.
(%) 3.9 2.3 1.7
Total
Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3
S.D.
(U/L) 1.3 2.3 2.9
C.
V. (%) 3.9 2.8 2.0
Sensitividad:
La
sensitividad de este reactivo cuando usado segun recomendado es 0.0103 mA /
min por U/L
Nota:
Datos obtenidos mediante pruebas realizadas en el Synchron CX..
REFERENCIAS
1.
Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1st ed. Frankfurt: TH-Books
Verlagsgesellschaft; 1998. P.80-6.
2.
Moss DW, Henderson AR. Clinical enzymology. In:Burtis CA, Ashwood ER, editors.
Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia: WB Saunders
Company; 1999. P. 617-721.
3.
Demetriou, J.A., Drewes, P.A., Gin, J.B., Clinical Chemistry: Principles and
Technics, 2nd Ed., Hagerstown (MD), Harper Row, pp 872-873 (1974).
4.
Orlowski, M., Meister, A., Biochem, Biophys. Acta 73:679 (1963).
5.
Kulhanek, V., Dimov, D.M., Clin. Chem. Acta 14:619 (1966).
6.
Szasz, G., Clin. Chem. 15:124 (1969).
7.
Szasz, G., Persijn, J.P., et al, A Klin. Chem. Klin. Biochem. 12:228 (1974).
8.
Shaw LM, Stromme JH, London JL, Theodorsen L. International Federation of
Clinical Chemistry, (IFCC), Scientific Committee, Analytical Section. IFCC
methods for the measurment of catalytic concentration of enzymes. Part 4. IFCC
method for gamma-glutamyl-transferase [(gamma-glutamyl)-peptide: amino acid
gamma-glutamyltransferase, EC 2.3.2.2]. J Clin Chem Clin Biochem 1983;
21:633-46.
9.
Rosalki, S.B., Advances in Clinical Chemistry, Vol. 17, New York, Academic
Press, p.53 (1975).
10. Young, D.S., et al, Clin. Chem.
21:1D (1975).
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