TRIGLICERIDOS (LIQUIDO) JAS-YAZ
TECNICA
USO:
Reactivo utilizado para la determinación cuantitativa “in vitro” de Triglicéridos en
suero.
RESUMEN Y EXPLICACION:
Las concentraciones de Trigliceridos son usadas en el diagnóstico y la dirección de
enfermedades que implican metabolismo de lípido, diabetes mellitus, nephrosis,
enfermedad de hígado, y varios desórdenes endocrinos.
METODOLOGIA:
Los Triglicéridos han sido comúnmente determinados por métodos que liberan y miden glicerol.
Esta liberación se ha desarrollado ya sea por hidrólisis enzimática o con el uso de un álcali. 1,2 El
primer método completamente enzimático fue descrito por Bucolo y David3 en 1973. Este método
fue modificado a una prueba colorimetrica por Megraw et al 4 en 1979. El presente método usa una
modificación del método Trinder 5,6, que es una reacción rápida de color de punto final y lineal. 7,8.
Reactivo utilizado para la determinación cuantitativa “in vitro” de Triglicéridos en
suero.
RESUMEN Y EXPLICACION:
Las concentraciones de Trigliceridos son usadas en el diagnóstico y la dirección de
enfermedades que implican metabolismo de lípido, diabetes mellitus, nephrosis,
enfermedad de hígado, y varios desórdenes endocrinos.
METODOLOGIA:
Los Triglicéridos han sido comúnmente determinados por métodos que liberan y miden glicerol.
Esta liberación se ha desarrollado ya sea por hidrólisis enzimática o con el uso de un álcali. 1,2 El
primer método completamente enzimático fue descrito por Bucolo y David3 en 1973. Este método
fue modificado a una prueba colorimetrica por Megraw et al 4 en 1979. El presente método usa una
modificación del método Trinder 5,6, que es una reacción rápida de color de punto final y lineal. 7,8.
PRINCIPIOS:
Triglicéridos + H2O Lipasa Glicerol + ácidos grasos
Glicerol + ATP GK G3P + ADP
G3P + O2 GPO DAP + H2O2
H2O2 + 4AAP + 3,5DHBS POD Tinte Quinoneimina + 2H2O
COMPOSICION DEL REACTIVO:
Ingredientes activos Concentración
ATP 2.5 mM
Sal de magnesio 2.6 mM
4-Amino antipirina 0.8 mM
3,5 DHBS 1.0 mM
GPO (microbial) 11,000 U/L
Lipoproteína Lipasa (microbial) 4,400 U/L
GK (microbial) 660 U/L
Peroxidase de rábano 2,900 U/L
Buffer 50 mM
Ázida de sodio (0.05%) como preservativo
pH (6.8 – 7.2)
PRECAUCION:
1. Este reactivo contiene ázida de sodio como preservativo. Esto puede
reaccionar con la tubería de cobre o plomo. Cuando descarte, utilice
abundante agua.
2. Este reactivo es solo para uso “in vitro”.
Triglicéridos + H2O Lipasa Glicerol + ácidos grasos
Glicerol + ATP GK G3P + ADP
G3P + O2 GPO DAP + H2O2
H2O2 + 4AAP + 3,5DHBS POD Tinte Quinoneimina + 2H2O
COMPOSICION DEL REACTIVO:
Ingredientes activos Concentración
ATP 2.5 mM
Sal de magnesio 2.6 mM
4-Amino antipirina 0.8 mM
3,5 DHBS 1.0 mM
GPO (microbial) 11,000 U/L
Lipoproteína Lipasa (microbial) 4,400 U/L
GK (microbial) 660 U/L
Peroxidase de rábano 2,900 U/L
Buffer 50 mM
Ázida de sodio (0.05%) como preservativo
pH (6.8 – 7.2)
PRECAUCION:
1. Este reactivo contiene ázida de sodio como preservativo. Esto puede
reaccionar con la tubería de cobre o plomo. Cuando descarte, utilice
abundante agua.
2. Este reactivo es solo para uso “in vitro”.
PREPARACION DE LOS REACTIVOS:
El reactivo esta listo para usarse.
ESTABILIDAD Y ALMACENAMIENTO:
1. Almacenar el reactivo en refrigeración (2-8°C)
2. El reactivo es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta
cuando se almacena de 2-8°C.
DETERIORO DEL REACTIVO:
NO USE EL REACTIVO SI:
1. El reactivo esta turbio.
2. El reactivo tiene una absorbancia mayor de 0.200 usando agua como
referencia a 500 - 510 nm.
3. El reactivo no recupera los valores indicados en el suero control.
TOMA Y MANEJO DE MUESTRA:
1. Se recomienda el uso de muestras en suero de pacientes con un ayuno mínimo de 7 horas.
2. No usar muestras hemolizadas o altamente ictéricas.
3. Los Triglicéridos estables en suero son por varios días cuando son almacenadas de 2 a 8°C.
4. No almacene muestras a temperatura ambiente.
INTERFERENCIAS:
1. Los siguientes resultados fueron obtenidos en estudios para determinar el nivel de
interferencia de hemoglobina, y bilirubina.
Hemoglobina:
No interferencia (±10%) hasta 300 mg/dL
El reactivo esta listo para usarse.
ESTABILIDAD Y ALMACENAMIENTO:
1. Almacenar el reactivo en refrigeración (2-8°C)
2. El reactivo es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta
cuando se almacena de 2-8°C.
DETERIORO DEL REACTIVO:
NO USE EL REACTIVO SI:
1. El reactivo esta turbio.
2. El reactivo tiene una absorbancia mayor de 0.200 usando agua como
referencia a 500 - 510 nm.
3. El reactivo no recupera los valores indicados en el suero control.
TOMA Y MANEJO DE MUESTRA:
1. Se recomienda el uso de muestras en suero de pacientes con un ayuno mínimo de 7 horas.
2. No usar muestras hemolizadas o altamente ictéricas.
3. Los Triglicéridos estables en suero son por varios días cuando son almacenadas de 2 a 8°C.
4. No almacene muestras a temperatura ambiente.
INTERFERENCIAS:
1. Los siguientes resultados fueron obtenidos en estudios para determinar el nivel de
interferencia de hemoglobina, y bilirubina.
Hemoglobina:
No interferencia (±10%) hasta 300 mg/dL
Bilirubina:
No usar muestras visiblemente itericas.
2.Un número de drogas y sustancias afectan la determinación de triglicéridos. Ver
Young, et al. 9
3.Glicerol en tapones de goma o cristalería contaminada, etc. puede causar
resultados elevados.
4.Muestras altamente hemolisadas con valores altos de bilirrubinas puede producir
falsos resultados elevados de triglicéridos.
5.Algunos detergentes interfieren con la reacción mediante la producción de un
precipitante de color rojo. Se recomienda Lavar bien la cristalería utilizada.
EQUIPO ADICIONAL REQUERIDO PERO NO INCLUIDO:
1. Analizador de química clínica capaz de mantener temperatura de 37°C
constante y medir absorbancia a 500 - 510nm.
2. Agua destilada y equipo relacionado, ejemplo. Pipetas.
3. Consumibles específicos para el analizador ejemplo. Copillas de muestras
4. Material control como los proporcionados por JAS
PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO:
Procedimiento para uso manual.
1. El reactivo se usa como se presenta. El reactivo debe estar a temperatura
ambiente antes de su uso.
2. Identificar perfectamente los tubos de prueba, tanto para controles, estándar
y muestras desconocidas.
3. Coloque 1000 μL del reactivo en cada tubo de prueba e incubar a 37ºC.
4. Agregar 10 μL de Estándar, muestra problema y/o suero control a su
correspondiente tubo de prueba. Mezclar mientras se mantiene constante la
temperatura.
5. Ajustar a cero el espectrofotómetro con blanco de reactivo a 500 - 510 nm.
6. Incubar todos los tubos a 37ºC. durante 5 minutos.
7. Tome la medición de absorbancia exactamente a los 5 minutos después de
la adición de cada muestra. Lea y registre la absorbancia del estándar y los
controles de la misma forma.
Notas:
1. Este ensayo requiere el uso de un Suero Estandar o Estándar apropiado.
2. Los volúmenes de muestra y reactivo pueden ser modificados proporcionalmente
para adaptarlos a los requisitos de varios instrumentos.
No usar muestras visiblemente itericas.
2.Un número de drogas y sustancias afectan la determinación de triglicéridos. Ver
Young, et al. 9
3.Glicerol en tapones de goma o cristalería contaminada, etc. puede causar
resultados elevados.
4.Muestras altamente hemolisadas con valores altos de bilirrubinas puede producir
falsos resultados elevados de triglicéridos.
5.Algunos detergentes interfieren con la reacción mediante la producción de un
precipitante de color rojo. Se recomienda Lavar bien la cristalería utilizada.
EQUIPO ADICIONAL REQUERIDO PERO NO INCLUIDO:
1. Analizador de química clínica capaz de mantener temperatura de 37°C
constante y medir absorbancia a 500 - 510nm.
2. Agua destilada y equipo relacionado, ejemplo. Pipetas.
3. Consumibles específicos para el analizador ejemplo. Copillas de muestras
4. Material control como los proporcionados por JAS
PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO:
Procedimiento para uso manual.
1. El reactivo se usa como se presenta. El reactivo debe estar a temperatura
ambiente antes de su uso.
2. Identificar perfectamente los tubos de prueba, tanto para controles, estándar
y muestras desconocidas.
3. Coloque 1000 μL del reactivo en cada tubo de prueba e incubar a 37ºC.
4. Agregar 10 μL de Estándar, muestra problema y/o suero control a su
correspondiente tubo de prueba. Mezclar mientras se mantiene constante la
temperatura.
5. Ajustar a cero el espectrofotómetro con blanco de reactivo a 500 - 510 nm.
6. Incubar todos los tubos a 37ºC. durante 5 minutos.
7. Tome la medición de absorbancia exactamente a los 5 minutos después de
la adición de cada muestra. Lea y registre la absorbancia del estándar y los
controles de la misma forma.
Notas:
1. Este ensayo requiere el uso de un Suero Estandar o Estándar apropiado.
2. Los volúmenes de muestra y reactivo pueden ser modificados proporcionalmente
para adaptarlos a los requisitos de varios instrumentos.
PROCEDIMIENTO AUTOMATIZADO.
Estas instrucciones son para ser utilizadas como guía general para la adaptación al
instrumento automatizado. Se encuentran disponibles a petición las aplicaciones de
los reactivos JAS para los analizadores más comunes.
Estas instrucciones son para ser utilizadas como guía general para la adaptación al
instrumento automatizado. Se encuentran disponibles a petición las aplicaciones de
los reactivos JAS para los analizadores más comunes.
PARÁMETROS
Trigliceridos
Temperatura 37ºC
Longitud de onda 500 - 510 nm
Tipo Punto Final
Dirección Creciente
Proporción muestra/reactivo 1:100
Volumen de reactivo 1.0 mL
Volumen de muestra 0.010 mL
Tiempo de incubación 5 Min.
Trigliceridos
Temperatura 37ºC
Longitud de onda 500 - 510 nm
Tipo Punto Final
Dirección Creciente
Proporción muestra/reactivo 1:100
Volumen de reactivo 1.0 mL
Volumen de muestra 0.010 mL
Tiempo de incubación 5 Min.
NOTAS:
1.Los volúmenes de reactivo y muestras pueden ser alterados proporcionalmente
para adaptarlos a los requisitos del instrumento automatizado seleccionado.
2.El color final es estable por 15 minutos.
3.Las muestras con valores de triglicéridos mayores de 800 mg/dL deben ser
diluidas 1:1 con agua y reensayadas, y los resultados multiplicados por 2.
1.Los volúmenes de reactivo y muestras pueden ser alterados proporcionalmente
para adaptarlos a los requisitos del instrumento automatizado seleccionado.
2.El color final es estable por 15 minutos.
3.Las muestras con valores de triglicéridos mayores de 800 mg/dL deben ser
diluidas 1:1 con agua y reensayadas, y los resultados multiplicados por 2.
CALCULOS
ABS. = Absorbancia
Absorbancia de la muestra x Concentración del estándar (mg/dL)
Absorbancia del estándar.
Ejemplo de cálculos:
Abs. Muestra = 0.300
Abs. Estandar = 0.200
Valor Estandar = 300 mg/dL
0.300 x 300 = 450 mg/dL Triglicéridos
0.200
Nota: Para obtener resultados en S.I., multiplicar los resultados en mg/dL x 0.113 =
mmol/L
Limitaciones:
El Glicerol (libre y el liberado mediante la hidrólisis de triglicéridos) es medido por
este procedimiento. Los niveles de glicerol libre en suero son generalmente bajos,
pero resultados falsos elevados en la muestra pueden ser causados por
contaminación o por un almacenaje inadecuado.
ABS. = Absorbancia
Absorbancia de la muestra x Concentración del estándar (mg/dL)
Absorbancia del estándar.
Ejemplo de cálculos:
Abs. Muestra = 0.300
Abs. Estandar = 0.200
Valor Estandar = 300 mg/dL
0.300 x 300 = 450 mg/dL Triglicéridos
0.200
Nota: Para obtener resultados en S.I., multiplicar los resultados en mg/dL x 0.113 =
mmol/L
Limitaciones:
El Glicerol (libre y el liberado mediante la hidrólisis de triglicéridos) es medido por
este procedimiento. Los niveles de glicerol libre en suero son generalmente bajos,
pero resultados falsos elevados en la muestra pueden ser causados por
contaminación o por un almacenaje inadecuado.
CALIBRACION:
Esta prueba debe ser calibrada utilizando un calibrador como el Calibrador de
Quimica de JAS ( P/N: CAL1-5) o un estandard apropiado.
Esta prueba debe ser calibrada utilizando un calibrador como el Calibrador de
Quimica de JAS ( P/N: CAL1-5) o un estandard apropiado.
CONTROL DE CALIDAD:
La integridad de la reaccion debe ser evaluada usando un control de dos niveles con
valores conocidos como el JAS Control de Quimica ( P/N: CON1-5 y CON2-5).
La integridad de la reaccion debe ser evaluada usando un control de dos niveles con
valores conocidos como el JAS Control de Quimica ( P/N: CON1-5 y CON2-5).
VALORES ESPERADOS: 10
Normales: <150 mg/dL
Limite: 150 - 199 mg/dL
Alto: 200 - 499 mg/dL
Muy Alto: > 500 mg/dL
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de valores
normales.
Normales: <150 mg/dL
Limite: 150 - 199 mg/dL
Alto: 200 - 499 mg/dL
Muy Alto: > 500 mg/dL
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de valores
normales.
DESEMPEÑO:
Linearidad:
Cuando el ensayo se trabaja bajo las recomendado éste linear de 2.6 - 800 mg/dL.
Comparacion del Metodo:
Los siguientes resultados fueron obtenidos mediante estudios realizados entre éste
procedimiento y uno similar:
Numero de pares de muestras 45
Rango de muestras 50.0 – 380.0 (mg/dL)
Coeficiente de Correlación 0.9933
Pendiente 1.099
Intercepto 0.2 (mg/dL)
Precision:
Entre Corridas Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3
Promedio (mg/dL) 52.7 147.4 271.6
S.D. (mg/dL) 2.7 2.6 1.16
C.V. (%) 5.2 1.7 2.8
Entre Series: Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3
S.D. (mg/dL) 2.8 4.4 13.0
C.V. (%) 5.4 3.0 4.8
Sensitividad:
Un factor de calibración aproximado a 980.71 fue obtenido, lo cual es equivalente a
una sensibilidad de 0.0010 Δ Abs por mg/dL.
NOTA: Estudios realizados en Synchron CX.
Linearidad:
Cuando el ensayo se trabaja bajo las recomendado éste linear de 2.6 - 800 mg/dL.
Comparacion del Metodo:
Los siguientes resultados fueron obtenidos mediante estudios realizados entre éste
procedimiento y uno similar:
Numero de pares de muestras 45
Rango de muestras 50.0 – 380.0 (mg/dL)
Coeficiente de Correlación 0.9933
Pendiente 1.099
Intercepto 0.2 (mg/dL)
Precision:
Entre Corridas Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3
Promedio (mg/dL) 52.7 147.4 271.6
S.D. (mg/dL) 2.7 2.6 1.16
C.V. (%) 5.2 1.7 2.8
Entre Series: Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3
S.D. (mg/dL) 2.8 4.4 13.0
C.V. (%) 5.4 3.0 4.8
Sensitividad:
Un factor de calibración aproximado a 980.71 fue obtenido, lo cual es equivalente a
una sensibilidad de 0.0010 Δ Abs por mg/dL.
NOTA: Estudios realizados en Synchron CX.
Limitaciones:
El Glicerol (libre y el liberado mediante la hidrólisis de triglicéridos) es medido por
este procedimiento. Los niveles de glicerol libre en suero son generalmente bajos,
pero resultados falsos elevados en la muestra pueden ser causados por
contaminación o por un almacenaje inadecuado.
REFERENCES
1. Wieland, 0.,Methods of Enzymatic AnaIysis, H.O. Bergermayer, Ed., Academic Press pp.
211-214 (1963).
2. Eggstein, M., Kreutz, F.H., Klin.Wochenschr. 44:262 (1966).
3. Bucolo, G., David, H., Clin. Chem. 19:656 (1973).
4. Megraw, R., et al Clin. Chem. 25:273 (1979).
5. Trinder, P., Ann. Clin. Biochem 6:24 (1969).
6, Barham, D., Trinder, P., Analyst 97:142 (1972).
7. Fossati, P., Prencipe, L., Clin. Chem, 28:2077 (1982).
8. McGowan, MW., et al, Clin. Chem, 29:538 (1983).
9. Young, D.S., et al, Clin. Chem. 21:1D (1975).
10. National Institute of Health Publication No.01-3670, 3rd Report of NCEP Expert Panel on
Detection, Evaluation, & Treatment of High Cholesterol in Adults (Adult Treatment Panel III)
May (2001).
El Glicerol (libre y el liberado mediante la hidrólisis de triglicéridos) es medido por
este procedimiento. Los niveles de glicerol libre en suero son generalmente bajos,
pero resultados falsos elevados en la muestra pueden ser causados por
contaminación o por un almacenaje inadecuado.
REFERENCES
1. Wieland, 0.,Methods of Enzymatic AnaIysis, H.O. Bergermayer, Ed., Academic Press pp.
211-214 (1963).
2. Eggstein, M., Kreutz, F.H., Klin.Wochenschr. 44:262 (1966).
3. Bucolo, G., David, H., Clin. Chem. 19:656 (1973).
4. Megraw, R., et al Clin. Chem. 25:273 (1979).
5. Trinder, P., Ann. Clin. Biochem 6:24 (1969).
6, Barham, D., Trinder, P., Analyst 97:142 (1972).
7. Fossati, P., Prencipe, L., Clin. Chem, 28:2077 (1982).
8. McGowan, MW., et al, Clin. Chem, 29:538 (1983).
9. Young, D.S., et al, Clin. Chem. 21:1D (1975).
10. National Institute of Health Publication No.01-3670, 3rd Report of NCEP Expert Panel on
Detection, Evaluation, & Treatment of High Cholesterol in Adults (Adult Treatment Panel III)
May (2001).
JAS
Diagnostics, Inc.
7220 NW58th St.,Miami Florida 33166
7220 NW58th St.,Miami Florida 33166
Datos de Contacto:Correo: distribuidora0270@gmail.com
Necesito el inserto del magnesio
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