CREATININA (UNI VIAL) JAS-YAZ
TECNICA
USO
Para
a determinación cuantitativa in vitro de Creatinina en suero y orina.
RESUMEN
1
Las
medidas de Creatinina son utilizadas en el diagnostico y tratamiento de la
función renal, incluyendo enfermedades, monitoreo de la diálisis renal y como
una base en el calculo para medir otros compuestos en la orina. Niveles altos
de Creatinina son encontrados en enfermedades renales y en la deficiencia con
la disminución de la filtración glomerular (uremia o azotemia, si es severo);
obstrucción del tracto urinario; flujo de sangre renal reducido incluyendo
falla congestiva del corazón, deshidratación e impresión; la rhabdomyiolysis
causa nivele alto de Creatinina, el cual puede elevarse fuera de proporción
para BUN, o a la reducción de la función renal.
METODOLOGIA
Jaffe2
describió un método en 1886 para la determinación de Creatinina, el cual
envolvía un filtrado libre de proteína y una reacción con ácido pícrico en una
solución alcalina. Aunque desde entonces se han descrito varios métodos, el
método clásico de reacción de Jaffe sigue siendo el más utilizado. La reacción
de Jaffe esta sujeta a interferencias por un sinnúmero de sustancias,
incluyendo proteína y glucosa. 3,4,5 Se han desarrollado modificaciones del
procedimiento para combatir estas desventajas.6 Los procedimientos7 cinéticos
han sido populares ya que son rápidos, simples y evitan interferencias. Este
método esta basado en la modificación del procedimiento descrito, incorporando
el surfactante y otros ingredientes para minimizar las interferencias de
proteínas y carbohidratos.
PRINCIPIO
Alkali
Creatinina
+ Picrate de Sodio Complejo Creatinina-picrate
(amarillo-anaranjado)
La
Creatinina reacciona con el ácido pícrico en condiciones alcalinas para formar
un complejo de color, el cual absorbe a 510nm. La velocidad en la que se forma
el color es proporcional a la Creatinina en la muestra.
COMPOSICION
DEL REACTIVO
Ingredientes
Activos Concentracion
Acido
Picrico 10 mM
Hidroxido
de Sodio 250 mM
pH
(12.8 – 13.2)
PRECAUCIONES
1.
Este reactivo es solo para uso in vitro.
2.
El ácido pícrico es un agente oxidante fuerte. Evite contacto con la piel.
LIMPIE CUALQUIER DERRAME, YA QUE EL ÁCIDO PÍCRICO EVAPORADO ES EXPLOSIVO.
3.
El hidróxido de sodio es una base. Evite ingestión y contacto.
PREPARACION
DEL REACTIVO
El
reactivo se provee en un solo vial listo para ser utilizado.
ALMACENAJE
1.
Almacene el reactivo de 2 – 8ºC (refrigerado).
2.
El reactivo es estable hasta la fecha de expiración cuando se almacena de 2 –
8ºC.
3.
El reactivo debe protegerse de la luz cuando no este en uso.
DETERIORO
DEL REACTIVO
El
reactivo no debe utilizarse si:
1.
El reactivo esta turbio (contaminado).
2.
El reactivo falla en cumplir los parámetros de desempeño.
3.
La absorbancia inicial del reactivo es mayor de 0.330 a 500 – 510nm.
COLECCION
Y ALMACENAJE DE LA MUESTRA 8
1.
Se recomienda suero no hemolizado.
2.
Orina debe disolverse a una concentración final de aproximadamente 34 a 64
mg/dL. Se recomienda una dilución de 1: 100.
3.
La Creatinina en suero es estable por 7 días refrigerada (2 – 8ºC) y por varios
meses al congelarse (-20ºC) y protegerse de evaporación y contaminación.
4.
Muestras de orina son estables por lo menos por 7 días a 4ºC.
INTERFERENCIA
Se
realizaron estudios para determinar el nivel de interferencia de hemoglobina,
bilirrubina
y lipemia, se obtuvieron los siguientes resultados:
Hemoglobina: Ninguna (± 10%) interferencia
significativa de hemoglobina hasta 200 mg/dL.
Bilirubina: Ninguna (± 10%) interferencia
significativa de bilirrubina hasta 24.3 mg/dL.
Lipemia: Ninguna (± 10%) interferencia
significativa de lipemia hasta 1020 mg/dL medida como triglicéridos.
Un
sinnúmero de drogas y sustancias pueden afectar la exactitud de de la
Creatinina. Vea
Young,
et al.9
EQUIPO
ADICIONAL REQUERIDO NO PROVISTO
1.
Analizador químico capaz de mantener la temperatura constante (37ºC) y medir la
absorbancia a 500 – 510nm.
2.
Agua deionizada y equipo relacionado, e.g pipetas.
3.
Consumibles especificos del analizador, e.g.: copas de muestras
4.
Controles y Calibradores como los provistos por JAS.
PROCEDIMIENTO
MANUAL
1.
Prepare la cubeta del espectrofotómetro a una temperatura de 37°C.
2.
Añada 1.0 mL de reactivo en cada tubo.
3.
Pre-caliente los tubos a 37°C por aproximadamente 5 minutos.
4.
Lleve a cero el espectrofotómetro con el blanco del reactivo a 510 nm (500 –
520 nm).
5.
Añada 0.10 mL (100ul) de muestra al reactivo, mezcle y colóquelo en la cubeta
inmediatamente.
6.
Después de exactamente 60 segundos lea y documente la absorbancia (A1).
7.
Después de exactamente 60 segundos de la lectura A1, vuelva a leer y a
documentar la absorbancia (A2), i.e. el tiempo entre A1 y A2 es 60 segundos.
8.
Calcule el cambio en absorbancia ( Abs/min) sustrayendo (A2-A1). Vea la seccion
de calculos.
PROCEDIMIENTO
AUTOMATIZADO
Estas
instrucciones son para ser utilizadas como guía general para adaptar
instrumentos automatizados seleccionados. Refiérase a la aplicación del
instrumento disponible.
PARAMETROS
Temperatura:
37°C
Largo
de Onda: 510 nm
Tipo
Ensayo: Fixed Rate
Direccion:
Increase
Razon
Muestra// Reactivo: 1: 10
e.g.
Vol. Muestra 0.1 mL (100L)
Vol.
Reactivo 1.0 mL
1er
tiempo de lectura: 60 Sec
Tiempo
de retraso: 120 Sec
Ultimo
tiempo de lectura: 180 Sec
NOTAS
DEL PROCEDIMIENTO
Los
volúmenes de la muestra y del reactivo pueden ser alterados proporcionalmente
para
acomodar
varios requisitos del instrumento.
Calculos:
(A = Absorbancia)
A
paciente x Concentración del estándar = Creatinina
A
estándar (mg/dL) (mg/dL)
Ejemplo:
A
paciente = 0.01
A
estándar = 0.05
Concentración
del estándar = 5 mgldL.
0.01
x 5 = 1.0 mg/dL Creatinina
0.05
LIMITACIONES
Muestras con valores mayores
de 20.0 mg/dL deben diluirse 1:1 con salina y re-analizarlas. El resultado final
debe ser multiplicado por dos.
CALIBRACIÓN:
Esta
prueba debe ser calibrada utilizando un calibrador como el Calibrador de
Quimica de JAS ( P/N: CAL1-5) o un estandard apropiado.
CONTROL
DE CALIDAD:
La
integridad de la reaccion debe ser evaluada usando un control de dos niveles
con valores conocidos como el JAS Control de Quimica ( P/N: CON1-5 y CON2-5).
VALORES
ESPERADOS10
Suero:
0.60 – 1.40 mg/dL
Orina:
0.80 – 2.00 g/día
Es
estrictamente recomendado que cada laboratorio establezca su propio rango de
referencia.
DESEMPEÑO
Linealidad:
Cuando
se analiza como recomendado el ensayo es lineal de 0.1 – 20.0 mg/dL
Método
de Comparación:
Estudios
realizados entre este procedimiento y un metodo similar recuperaron los
siguientes resultados:
Serum
Orina *
Numero
de pares de muestras: 49 44
Rango
de muestras: 0.40 – 19.80 (mg/dL) 17-355 (mg/dL)
Coeficiente
Correlación: 0.9994 0.9952
Pendiente:
0.9734 1.04
Intercepto:
-0.02 (mg/dL) -0.30 (mg/dL)
Precision:
Entre
Corridas Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3
Promedio
(mg/dL) 1.28 7.24 12.00
S.D.(mg/dL)
0.08 0.06 0.10
C.V.
(%) 6.3 0.9 0.8
Corrida
a Corrida Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3
S.D.(mg/dL)
0.08 0.10 0.16
C.V.
(%) 6.3 1.3 1.3
Sensitividad:
Un
factor de calibración aproximado de 100.6 obtenido, lo cual es equivalente a
una sensitividad de 0.0094 Abs por mg/dL.
*
NOTAS: El desempeño se estableció en el Synchron CX.
Método
de Comparación de orina se estableció en el Roche Cobas Mira.
REFERENCIAS
1. Tilzer L.L., Jacobs D.S.
“Laboratory Test Handbook” 3rd Ed, Lexi-Comp Inc., p.202 (1994).
2. Jaffe, M., Z. Physiol. Chem.
10:391 (1886).
3. DiGiorgio, J., Clinical
Chemistry: Principles and Technics, 2nd Ed., Edited by Henry, R.J., et al,
Hagerstown (MD), Harper & Row, pp. 541-553 (1974).
4. Cook, J.G.H., Ann. Clin.
Biochem. 12:219 (1975).
5. Taussky, H.H., Standard Methods
of Clinical Chemistry, Vol. 3, New York Academic Press, p.99 (1966).
6. Heinegard, D., Tiderstom, G.,
Clin. Chem. Acta, 43:305 (1973).
7. Fabiny, D.L., Ertingshausen, G.,
Clin. Chem. 17:391 (1971).
8. Tietz N.W. (Ed). Textbook of
Clinial Chemistry, W.B. Saunders, 1986;1278.
9. Young, D.S. et al, Clin. Chem.
21:1D (1975).
10. Henry RJ (Ed), Clin. Chem.,
Principles and Technics (2nd Ed), Harper and Row, 1974;548-551.
JAS
Diagnostics, Inc.
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